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激光共聚焦顯微鏡對(duì)于樣品有特殊要求嗎

返回列表 來(lái)源:本站 發(fā)布日期:2024-11-11 13:29:36【

激光共聚焦顯微鏡對(duì)于樣品確實(shí)有特殊要求,這些要求因樣品類型的不同而有所差異。以下是對(duì)不同類型樣品的具體要求:

一、生物樣品

熒光表達(dá):

在進(jìn)行激光共聚焦顯微鏡測(cè)試前,應(yīng)先在熒光顯微鏡下觀察熒光表達(dá)是否正常,以確定是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡。

蓋玻片厚度:

蓋玻片的厚度要求≤0.17mm,以確保測(cè)試的準(zhǔn)確性和避免對(duì)樣品的損傷。

激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng):

需要明確樣品的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng),以便選擇合適的激光器和探測(cè)器進(jìn)行測(cè)試。

激光共聚焦顯微鏡VSPI.jpg

掃描參數(shù):

對(duì)于需要重構(gòu)的樣品,需要明確掃描區(qū)域大小、位置和Z步進(jìn)等參數(shù),這些參數(shù)會(huì)影響測(cè)試時(shí)間和結(jié)果。

樣品固定:

樣品B須貼壁良好,不能懸浮起來(lái)。需要在載玻片上固定好后送樣測(cè)試。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,可以將其鋪在孔板中的爬片上,按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行孵育、固定和染色后,將爬片的細(xì)胞面扣置在滴有封片劑的載玻片上。也可將細(xì)胞直接培養(yǎng)在共聚焦專用培養(yǎng)皿中進(jìn)行觀察。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,可以用微量移液器吸取適量樣品滴加到載玻片上,用蓋玻片封片。

組織切片樣品需要采集適當(dāng)大小的組織,經(jīng)固定、冷凍包埋、冷凍切片、免疫熒光標(biāo)記后,用蓋玻片封片。

抗熒光淬滅劑:

做顯微成像時(shí),樣品需要加抗熒光淬滅劑,蓋玻片也需要固定。

二、材料樣品

樣品制備:

材料樣品需要提前制備好,并確保樣品平整。

樣品尺寸:

拍出來(lái)的樣品*大面積應(yīng)在1.11x1.8mm到5x5mm范圍內(nèi),顏色可調(diào)。但樣品的尺寸沒(méi)有嚴(yán)格要求。

三、其他注意事項(xiàng)

樣品質(zhì)量:

載玻片和蓋玻片需要選擇質(zhì)量好、光潔、無(wú)雜質(zhì)的。對(duì)于重要實(shí)驗(yàn),需要提前檢查載玻片和蓋玻片的光學(xué)特性,確保無(wú)熒光干擾。

樣品處理:

樣品需經(jīng)熒光探針標(biāo)記(可單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo))。

樣品表面應(yīng)盡量無(wú)氧化皮,觀察表面應(yīng)拋光,以保證表面光潔度和平整度。粉末樣品應(yīng)壓實(shí),保證表面平整。

綜上所述,激光共聚焦顯微鏡對(duì)于不同類型樣品有特殊要求,這些要求涉及樣品的熒光表達(dá)、蓋玻片厚度、激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)、掃描參數(shù)、樣品固定、抗熒光淬滅劑使用以及樣品質(zhì)量和處理等多個(gè)方面。為確保測(cè)試的準(zhǔn)確性和可靠性,需要嚴(yán)格按照這些要求準(zhǔn)備和處理樣品。

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